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一次对于利用产气荚膜梭菌进行2个国标检测的关节确认流程偏执收成

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作家：菩提

剪辑：兔兔子

开首：实验助手app

相等鸣谢：青岛海博生物

1.引子

（一）为什么要检测产气荚膜梭菌？

   因为这个菌是要求致病菌，时常时跳出来害东说念主。产气荚膜梭菌是要求致病菌，最大的秉性是快速办法肌肉和结缔组织里的糖，产生多数气体（暴烈发酵实验可讲解注解），酿成肿胀和致病（主要有坏疽病）。要求致病菌是个啥东西？便是能让你得病，但有要求：要求1：免疫劣势或免疫力低下的东说念主容易感染。有免疫力的东说念主可以带着这个菌到处乱跑，没事。跑着跑着遭受一个免疫力劣势或免疫力低（老、弱、病）的东说念主，把菌给了对方，那被战争的一又友就比拟惨。

   要求2：菌去了不该去的场所。比如产气荚膜梭菌在肠说念里过的好好地，控制去了受伤的肌肉或结缔组织，那么菌就要吃肉，东说念主就要生病了。

   要求3：餍足纵容要求1或要求2都可能致病。

（二）产气荚膜梭菌检测关节诞生真理

   除了是要求致病菌外，产气荚膜梭菌种下不同菌株产毒才智也各不换取，加起来能坐褥15种以上毒素，其中以ABCDE五种毒素最为典型。产气荚膜梭菌检测关节诞生的真理还在于产气荚膜梭菌粗俗存在在当然界中，范围广昆仲多，是以容易被它混浊；产气荚膜梭菌感染东说念主的方式主若是菌从口入，病由口入，是以产气荚膜梭菌是食源性的要求致病菌。

   虽然这是国度制定圭臬要研究的事情，咱们知说念检测关节诞生很有真理就好了。算作检测东说念主员，咱们更伏击的热心是怎样作念好实验，让实验关节哄骗的更为畅达，无意候有一定微生物学基础的可能会好些，但就现在国情，从事微生物检测的还有许多正在奋力学习培育的非微生物学专科的期间东说念主员，是以咱们检测东说念主员更伏击的是要知说念每一步检测的主义以及为什么这样作念，当检测出现猜忌或和检测圭臬出现不符时候该怎样科罚更有真理。

（三）产气荚膜梭菌检测关节比拟

   鸿蒙初开，这世上本无对错，自从有了圭臬和比拟就有了优劣的分别。

   挑选的2个现行灵验国标，其一为：GB 4789.13-2012《食物安天下度圭臬食物微生物学测验 产气荚膜梭菌测验》。（以下简写，用圭臬号“GB 4789.13-2012”代替圭臬全名）；其二为：GB 8538-2016《食物安天下度圭臬饮用自然矿泉水测验关节》58产气荚膜梭菌。（以下简写，用“GB 8538-2016.58”代替圭臬对应产气荚膜梭菌检测花式）。

   产气荚膜梭菌检测关节有许多，挑选这2个圭臬进行关节学比拟。是因为这2个圭臬使用的比拟多，亦然我最近扩项用到的，是以更纯属一些。二个圭臬适用范围有所不同，GB 4789.13-2012适用于食物，GB 8538-2016适用于饮用自然矿泉水，除却GB 4789.13-201倾注平板关节和GB 8538-2016过滤水样外，其他检测部分其实是相似和可以互相参考和比拟优劣瑕瑜之分的。不影响关节的比拟和探索。

2.产气荚膜梭菌的分类学地位

   产气荚膜梭菌顾名想义能产气，有荚膜，是梭菌。这亦然率先科学家定名时候的秉性，这样的平允在于名字就带了菌的特色，秉性昭着（虽然仅仅中语名有这个秉性）。产气荚膜梭菌拉丁学名叫Clostridium perfringens，现在扫数的细菌拉丁体裁名均被微生物泰斗分类学手册“伯杰氏手册”（伯杰氏系统细菌学手册，Berger’s Manual of Systermatic Bacteriology）收录。

   浅显先容一下伯杰氏手册。伯杰氏手册依然发展到第9版了，前8版国内基本都有中语版。第9版国内较少，这不利于微生物学发展，故意放出伯杰氏手册英文版封面（下图）供众人参考。伯杰手册第9版共5卷7册（纸质版加起来重达15公斤）：

   卷1：古细菌和深分支菌及光合细菌，

   卷2：变形杆菌（三册）A册导论，B册γ（读音gamma）-变形杆菌，C册（α-，β-，δ-，ε-变形杆菌），

   卷3：卷3厚壁菌门，

   卷4：（拟杆菌， Spirochaetes螺旋体门， Tenericutes (Mollicutes)无壁菌门（柔壁菌门），Acidobacteria酸杆菌门， Fibrobacteres纤维杆菌门， Fusobacteria梭菌属， Dictyoglomi网团菌门， Gemmatimonadetes芽单孢菌门， Lentisphaerae黏胶球形菌门），

   卷5（到现在为止悉数才出到5卷A册）：A册放线菌门。

   产气荚膜梭菌发现比伯杰氏手册的创立早，是以其时世界列国发现这个菌的科学家定名时就证据我方的意愿起名字（未沿袭成习，也无什么特定例则），1898年Veillon和Zuber发面前叫作念“产气荚膜杆菌（Bacillus perfringens）”，在另外一个场所，1900年Migula发现并把它叫作念“魏氏细菌（Bacterium welchii）”。在1980年世界上又召开了一次细菌学大会，对菌种定名进行了合伙，对于以前的各式菌归到一个清单里（Lists 1980），产气荚膜梭菌也在其中。定名为:产气荚膜梭菌，全名叫：“Clostridium perfringens (Veillon and Zuber 1898) Hauduroy et al.1937，species.”，这一套法则是为了保证其独一性也为了悲悼发现的科学家，法则不丢脸出便是：拉丁文属名（斜体字）_拉丁文种名（斜体字）_发现东说念主名_发现年_分类学位置（比如种），“_”示意用空格离隔，尔后再有谁发现了新种以及跟着时辰和果断的变化要进行合并改动都需要依照一套严格的法则进行。

   是以产气荚膜梭菌在分类学地位上头是“种”（species），附庸于厚壁菌门梭状芽孢杆菌属。菌体秉性是革兰氏阳性杆菌，菌体粗大，二端钝圆，体内可形成芽孢。有荚膜，无鞭毛，厌氧滋长。

图2：产气夹膜梭菌革兰氏染色镜检不雅察 

   芽孢是抗逆环境的产物，糊口环境变恶劣时芽孢菌才会产生芽孢。2个国标关节中不易看到芽孢，主若是因为：

   （1）圭臬提供的TSC和SPS培养基养分较好，

   （2）20-24h就不雅察控制，时辰较短，还未形成。

   产气荚膜梭菌产生芽孢的秉性是产生芽孢时菌体不会推广，芽孢形成在菌体中部。

3.实验材料准备

（一）开导及材料准备

1.配培养基所用开导：

 （1）天平（百分之一以上天平，），

 （2）纯水机（制备培养基配制用水，或用蒸馏水机制备蒸馏水），

 （3）高压蒸汽灭菌器，

2.前处理开导：

 （1）天平（百分之一以上天平，称取食物样品用，略），

 （2）均质器（拍打式均质器），

 （3）漩涡混匀仪（遭受不少东说念主不配备混匀仪，民风用手振摇。建议使用混匀仪，定量实验，以免手振摇不均匀带来风险。）

3.操作开导：

 （1）超净台(略)，

 （2）2级生物安全柜，

 （3）三联过滤器（过滤水样），

4.培养材料及开导：

产气荚膜梭菌是厌氧菌，在厌氧环境种滋长邃密。常用的培养关节有：厌氧产气袋法、厌氧罐法、厌氧盒、厌氧手套箱等。

为了比拟实验，我作念实验时准备了以下开导。

 （1）厌氧袋（配套氧气连结剂、厌氧产气袋。厌氧产气袋无意也叫厌氧包或培养袋），

 （2）厌氧培养盒（配套氧气连结剂、厌氧产气袋），

 （3）厌氧操作箱（也叫手套箱，配气制造厌氧环境），

 （4）三气培养箱（CO2，N2，O2），

 （5）普通培养箱（用于厌氧产气袋和厌氧盒的存放培养安装）。

（二）培养基和试剂：

    1. 0.1%卵白胨水，

    2.胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂（TSC），（添加剂D-环丝氨酸）；

    3.亚硫酸钠盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础（SPS添加剂）

    4.液体硫酒精酸盐培养基（FTG)，

    5.含铁牛奶培养基，

    6.缓冲-能源硝酸盐（硝酸盐复原试剂，锌粉），买制品试剂盒验收后使用，便捷。

    7.乳糖-明胶培养基，

    8.卵黄琼脂培养基。

4.圭臬菌株准备

（告诫：从圭臬菌株滥觞都需要在生物安全柜里正确操作，并细心个东说念主驻防）

（一）本单元使用的阳性对照菌株：产气荚膜梭菌CICC22949。

     本单元使用的阴性对照菌株：重荷梭菌CICC22951。

（二）圭臬菌株的摄取。

   圭臬菌株的摄取以好意思国机构ATCC最为出名，但也不是他一家独大，因为伯杰手册明确规矩了，只须一家存有的圭臬菌株不被承认，也便是说外洋受骗某一个东说念主或机构发现了一个新种时，必须同期送往2家被认同的机构收藏，这个新种才会被外洋社会承认。这亦然为了反把持，无意候一株菌领有巨大的买卖利益，一家私藏，不利于微生物学科的发展。

   是以算作咱们，可能知说念的最出名的便是菌种收藏中心也便是好意思国的ATCC机构了，然而，不是好意思国ATCC一家独大。“伯杰氏手册”列举了被承认的机构的圭臬菌株信息，只须纸质材料能溯源到这几家单元其中之一即可。

（三）伯杰手册保举的对于产气荚膜梭菌圭臬圭臬菌株信息。

   我把手册中对于咱们此次产气荚膜梭菌测验实验用得到的阳性对照菌和阴性对照菌信息纲领如下：

1.阳性对照菌株：

（1）产气荚膜梭菌，Clostridium perfringens，“Type strain: ATCC 13124= BCRC (formerly CCRC) 10913 = CCUG 1795 = CIP 103409 = DSM 756 = JCM 1290 = LMG 11264 = NCAIM B.01417 = NCCB 89165 = NCIMB 6125 = NCTC 8237”。（参考：我单元所选产气荚膜梭菌CICC22949，可溯源到ATCC13124）。

2.阴性对照菌株：严格厌氧菌（任选其一即可）。

（2）重荷梭菌Clostridioides difficile，Type strain: AS 1.2184 = ATCC 9689= BCRC (formerly CCRC) 10642 = CCUG 4938 = CIP 104282 = DSM 1296 = JCM 1296 = LMG 15861 = NCIMB 10666 = NCTC 11209。（我单元所选重荷梭菌CICC22951，可溯源到ATCC43593）。

（3）生孢梭菌Clostridium sporogenes，Type strain: ATCC 3584= BCRC (formerly CCRC) 11259 = CCUG 15941 = CIP 106155 = DSM 795 = JCM 1416 = LMG 8421 = NCIMB 10696 = NCTC 13020.

其中国度食物药品监督管束总局科技和圭臬司编订的《微生物测验关节 食物安天下度圭臬 实操指南》（中国医药科技出书社2017.10）版块第143页图13.6乳糖-明胶液化实验中生孢梭菌的编号有误，ATCC64941应改成CMCC64941，众人细心一下。别真买成了ATCC64941，那是Cryptococcus neoformans菌。

（4）索氏梭菌Clostridium sordellii，Type strain: ATCC 9714= BCRC (formerly CCRC) 10649 = CCUG 9284 = CIP 103658 = DSM 2141 = JCM 3814 = LMG 15708 = NCIMB 10717。

   （参考：我单元所用的圭臬菌株均有圭臬菌株文凭，可溯源到上述外洋单元，购买追想后均进行了期间验收，及格后插足使用；使用前登记造册，编制菌株的独一性法例号。每次使用周期性（一月一次）验收，并赓续完善记载并都详确记载在册。保证菌株从买平直，期间验收，传代，使用直至就义均可溯源，同期保证菌株性能在使用期限内是灵验的。

   如果其他单元要购买（或依然购买了）圭臬菌株，需核查菌株信息，要有材料能讲解注解其可溯源到以上我列举的外洋单元，同期也要作念好菌株管束责任。）

5.实验操作

   在看我写这部分之前，建议众人把GB4789.13-2012和GB 8538-2016.58都分别读一下，否则有可能有场所看不解白。

图：几种产气荚膜梭菌培养基@青岛海博

（一）培养基制备

    1. 0.1%卵白胨水、TSC，SPS配制。

   在配制培养基流程中，TSC和SPS作念信得过样品时添加添加剂以扼制杂菌，模拟实验莫得添加（添加剂价钱不菲）。

   TSC和SPS培养基脱水合成培养基基础的样子（添加剂另配）

    2. FTG培养基配制。

    FTG需加多少许琼脂。加琼脂主若是怕液体流动回流，厌氧环境被破裂。不快乐见：本色流程中我加和不加都作念过，率先不加是因为健忘了：（。如果动作轻缓，管内FTG较长，不加琼脂也不影响菌的繁衍滋长，细心不雅察会发现，不加琼脂时，管子放到厌氧盒内很快就能变黄（厌氧现象）。

    FTG灭菌完成后细心放在厌氧要求下（比如厌氧盒或厌氧操作箱），这样可以使氧化层下行较慢。如果莫得要求就临时煮沸赶气。等再变成浅黄色包裹紧管口，遏抑氧气进入。经过反复几次实验，18*180管中配制15mL以上为宜（我一般配20mL）。

    FTG刚配出来时样子和灭菌后样子（有1管塞子崩了，量变少了）

FTG灭菌后↑

FTG灭菌前↑

    3.含铁牛奶培养基的配制。

   这个培养基建议不要用脱水合成制品培养基。而购买全脂鲜牛奶加硫酸亚铁。灭菌温度最佳选用115℃，5min，试管放在灭菌锅里的位置隔离加热管及内壁，以免已而过热变性絮凝。灭完菌赶早取出，急速冷水速冷却。

   配制含铁牛奶培养基折腾我不少时辰，起初便是商品化脱水培养基并不好使，是以我故意去买极新未脱脂的牛奶，然后添加完硫酸亚铁，混匀后灭菌。第一次115℃，10min，失败。卵白质絮凝变性了。设定这个温度时长是证据GB 8538-2016来的，同期加上咱们灭菌锅校准温度点有115℃。剥肤之痛，分析问题，找失败原因。分析出3个可能原因：

   （1）和牛奶议论。

   （2）和灭菌锅内放弃位置议论。

   （3）灭菌时长议论。

   找出原因捋起袖子加油干，去阛阓买了好几种全脂牛奶，然后配成培养基，量不变。

   在灭菌锅内不同位置（三层，每次2个，框中心1个，边上1个）放弃培养基，115℃10min灭菌；另一批次115℃，5min灭菌。灭菌完随即取出自来水急速冷却。实验后骄慢是：115℃，5min的均普通，没絮凝。115℃，10min的时有絮凝。同期发现较贵的牛奶絮凝的少或莫得絮凝。培养一周，无菌滋长，讲解注解了115℃，5min可灭菌，餍足实验要求。

    4.缓冲-能源硝酸盐培养基，乳糖-明胶培养基，买的制品试剂盒，卵黄琼脂培养基按要求树立莫得问题。

（二）样品处理

    1.固体样品处理。冷藏冷冻样品提前拿出来按要求化冻。

   固体样品称取25g±0.1g样品，放入均质袋，加入225mL事先灭菌好的稀释液，均质1min或2mins（咱们里面规矩2mins），然后进行10倍稀释梯度稀释。

    2.液体食物样品处理。

   液体样品GB4789.13-2012上没提，证据GB 4789系列其他圭臬稀释就好了，比如25mL加入225mL事先加了一些玻璃珠的灭好的稀释液，混匀打散，然后进行10倍稀释梯度稀释。也可以用均质袋均质（均质就不要加玻璃珠了）。

    3.自然饮用矿泉水样品处理。

   过滤法，混匀水样。配备0.1%卵白胨水，用于过滤后冲洗过滤开导。

    4.对于食物样品用的稀释液摄取问题。

   咱们作念检测时候一般用的稀释液主要有四种：纯水，0.85%生理盐水，磷酸盐缓冲溶液，卵白胨水。无意候有东说念主问稀释液怎样摄取，个东说念主意会是这样的：只须能成心于样品中的菌活下来便是好的稀释液。是以如果知说念居品的坐褥流程，知说念菌都经历了什么，就可以更好的摄取合适的稀释液，如果不知说念流程，那咱们就要知说念四种稀释液的各有什么优点，便捷我方摄取。

   （1）纯水莫得缓冲才智，受伤的菌可能会活不外来。

   （2）0.85%生理盐水，一般菌都安妥，氯化钠是细胞膜钠-钾泵的钠主要的提供者，同期0.85%这个浓度能均衡胞内胞外浸透压，是以对菌是成心的。

   （3）磷酸盐缓冲溶液、优点便是包容性好，缓冲才智强，能让菌在酸碱中起到一个保护作用，而不会因酸碱引起的波动酿成菌二次伤害或示寂，虽然这亦然相对的，样品过酸过碱需要迂曲pH至中性操纵为宜。

   （4）卵白胨水，又比以上稀释液要好，因为里面提供了一定的卵白胨养分物资，成心于濒死细菌的缓活过来。

   虽然了，缓冲溶液毫不啻这4种，如果想要更好的又有养分又有缓冲才智，亦然可以复配出更好的稀释液的。凡事都要慎重性价比，这个关节里面摄取0.1%卵白胨水已能餍足要求。

（三）稀释

   全程用圭臬菌株代替样品，是以稀释的便是圭臬菌株的稀释，从事先长好的菌苔，取1接种环培养好的菌株，加入9mL卵白胨水里打散，混匀，比对0.5麦氏比浊管，差未几就可以觉得此为10的8次方菌液（概数，因为后续会有好几个稀释度保证有安妥要求的菌落数可以计数，是以无谓操心浓度偏差了）。此设为菌液原液，然后按照10倍梯度稀释制成10-1~10-6系列稀释液。

二个关节的稀释液均用此系列稀释液稀释液进行实验。

（四）倒皿

   1. GB4789.13-2012选用倾倒法，取1mL菌液，加入无菌皿中，倾注TSC琼脂培养基，混匀，冷却，每稀释度2皿，10-1~10-6诡计14皿（带2个空缺，稀释液用1mL0.1卵白胨水）。同期用SPS倾注一份，算作对比使用，冷却后掩盖相同的培养基5-10mL。

   2. GB 8538-2016选用倾注法和过滤法同期进行。倾注法同GB4789.13-2012，仅仅倾注培养基用的是SPS。过滤法，取1mL水样加入50mL事先灭好的0.1mL卵白胨水中，混匀后过滤，作念2份，滤膜贴TSC和SPS培养基上培养。

（五）培养

   将以上平板放到厌氧产气袋中，弄好连结剂以及放好产气包，36℃正置培养24h，然后取出不雅察。

（六）控制盘算推算

   通过实验发现，掩盖了培养基的产气荚膜梭菌为玄色，莫得掩盖的则不变黑，另外TSC比SPS上菌数目更多。也更黑，跟着时辰的推移，TSC上菌变大速率比SPS更快，是以皿更黑。越过24h后如果菌较多则会有部分轮换延迟，不易记数，无意候SPS上菌还会不黑呈现灰白色。

TSC培养基上产气荚膜梭菌样子（倾倒法，名义掩盖培养基后）（高稀释度，低稀释度）： 玄色彰着，且24h较大，建议20h滥觞计数。

SPS上菌落样子（倾倒法，名义掩盖培养基后）（高稀释度，低稀释度）：灰玄色，玄色不彰着

 

   后续各式生化考确认验（能源本质，镜检，硝酸盐复原，暴烈发酵，，乳糖明胶本质，卵磷脂办法本质等）。由于本次菌为已知圭臬菌株，是以考证就变成了考证培养基性能了。

6.一些后续实验及履历总结

   共享屡次本质后获取的一些履历（其实都是拿失败换来的）。

（1）革兰氏染色的一些图片共享

革兰氏染色试剂套装@青岛海博

爱色岛

染色片

染色重点

冲洗后的染色片

   （1）含铁牛奶培养基暴烈发酵本质。最佳用18*180的管子，因为产气能冲很高，果真很剧烈。

    

发酵事后的图片共享（这如故相对比拟温情的时候，时辰越长，菌开动量越多越澎湃。）

   （2）卵黄琼脂培养本质。这个是用来作念卵磷脂酶本质的，从FTG中挑菌液无意候需要往下和多挑一些，因为我滥觞从皿上接种夙昔以及从FTG里取1环，控制皿上接夙昔的菌长了，也有骄慢了（乳白色浑浊）。而FTG里挑的菌液没发生骄慢。其后多挑一些菌液骄慢就出现了，是以这里挑菌液时候要往下点而且多挑一丝点。

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   （3）厌氧要求的模拟和比拟。

   咱们实验室微生物实验开导相对比拟都全，加上个东说念主对微生物学有极其浓厚的酷好，是以后续进行了厌氧操作箱，厌氧盒，三气培养箱和厌氧产气袋的实验比拟。然后发现了4种培养方式有所不同，为了保举其后东说念主作念实验需要，特写一下各自优劣。

   现在厌氧培养方式有厌氧盒、厌氧罐、厌氧袋+厌氧产气袋等关节。厌氧袋+厌氧产气袋法应用最遍及，安妥量大实验，有价廉物好意思的秉性。厌氧盒+厌氧产气袋法也可以，用盒代替了厌氧袋。厌氧罐抽气换气法：需要配备抽气换气安装；厌氧手套箱：比拟精湛。

   首选厌氧盒，因为只作念这个实验的话，厌氧盒密封性较好，能较永劫辰的督察厌氧环境。症结是贵了一丝。在咱们国情之下，厌氧盒和对应的入口产气包如故相对比拟贵的。尤其有多数实验时，需要买数个厌氧盒，推测提议苦求购买时雇主早抽你了。

   其次厌氧产气袋，质场所面比厌氧盒要次一丝，因为是软包装，就像烟草一样，软包装总比硬盒子要低一个头绪一样，然而平允是量大实惠，好用不贵。是以搪塞多数实验时更合适。

   厌氧操作箱，便捷安全，和厌氧盒一样，需要购买开导，如果同期开展多个厌氧检测花式，可研究购买。如果厌氧花式较少，买开导就不那么经济了。也便是说东西很好，有钱就上。

   三气培养箱，我不知说念别家三气培养箱什么情况，我家的三气培养箱氧浓度最低最低只可达到2%，下不去了。是以作念不到严格厌氧，长产气荚膜梭菌没问题，但阴性菌重荷梭菌就长不起来了。

（4）能源-硝酸盐实验控制图片共享。

 

   骄慢很彰着：无能源，沿穿刺线滋长；硝酸盐复原，滴加硝酸盐复原试剂（现用现配）后很快（几分钟内）显红色。

7.关节的不及之处

   经过反复实验以及查阅文件和参考敦厚们的培训，总结出GB 8538-2016国标关节的几点不及：

   （一）SPS培养着力和菌的回收率莫得TSC高，也便是说SPS培养基不如TSC。本色检测数目就会变少。

   （二）倾注平板法莫得说起掩盖的问题，如无掩盖，菌为浅黄或发白激情，不变黑。如果检测本色样品就可能酿成漏检。

（1）无掩盖，划线分离法，36℃厌氧，24h。产气荚膜梭菌划线在SPS平板上基本无玄色菌落。

 

（1）无掩盖，划线分离法，36℃厌氧，24h。产气荚膜梭菌划线在TSC平板上有少部分玄色菌落。

 

 

（2）有掩盖，倾注平板法，36℃厌氧，24h。产气荚膜梭菌倾注 SPS 平板，掩盖后，绝大多数是玄色菌落。

 

   细心“产气荚膜梭菌倾注SPS平板掩盖后”培养的图片，中间有手指状一个玄色区域，那是因为倾注前菌依然加了许久，酿成再怎样使劲依然无法把菌一都混散，这是平板计数法时候众人要细心的问题，故意摄取这张图以示讲解和申饬：加完菌液就要混匀，且力量要安妥，否则容易千里底、延迟、成坨。

 

（2）有掩盖，倾注平板法，36℃厌氧，24h。产气荚膜梭菌倾注TSC平板，掩盖后，绝大多数是玄色菌落。

   从SPS和TSC平板比拟来看，换取浓度菌液，产气荚膜梭菌再TSC上滋长要比SPS更黑（上图2个便是灭亡稀释度下平皿，屡次实验均如斯），另一方面 TSC 上菌的数目可能比SPS 多一些（这一丝还需我方和实验的同仁赓续多作念实验来考证。现在实验次数不够多，不行妄下论断），但有一丝可以细则也依然被众人写进著作发表了，那便是掩盖更能摄取出玄色菌落，不掩盖单纯从激情来摄取菌落会漏检甚而检不到。

   （三）含铁牛奶培养基配制模样信息过少，使用极新全脂牛奶加硫酸亚铁配制，灭菌要求设为115℃，5min为宜，放弃在灭菌锅中央为好。灭完尽快取出冷却。

   （四）GB 8538-2016中摄取卵磷酸酶实验并不统统够用。

三月底在北京实验助手举办的培训课上，听了何艳玲敦厚培训课，何敦厚说“乳糖-明胶本质”代替“卵磷脂办法本质”的原因：部分巴氏梭菌（C.baratii）在含铁牛奶培养基中也呈现“暴烈发酵”骄慢，但可以用乳糖明胶本质加以鉴别；另外一些产气荚膜梭菌卵磷脂酶才智较弱，可能会酿成假阴性，获益匪浅。

   （五）产气荚膜梭菌发酵葡萄糖，乳糖，麦芽糖，和蔗糖，产酸产气，这个菌虽厌氧，但不是苛性的，这几点需要细心，在大肠菌群实验初发酵产酸产气，复发酵不产酸产气时就有是产气荚膜梭菌在搞事情，不妨再按照产气荚膜梭菌检测关节检测一下，就当锻真金不怕火一下妙技吧。

8.跋文

   为什么想写这个著作，因前一段时辰咱们单元扩项，加多了GB 8538-2016《食物安天下度圭臬 饮用自然矿泉水测验关节》58产气荚膜梭菌的花式，同期由于之前战争较少，在关节考证时走了不少弯路， 同期也“销耗”了一些时辰（吉恶相依的真理，弯路也有平允，可以把这个关节和这个菌弄的更明白一些）。后查阅文件和利用我方所学的微生物学常识进行了一些实验摸索，一部分弄明白了，一部分和圭臬不一致的场所也克服繁难逾越夙昔了，获取的一些心多礼会。本年3月份有幸受实验助手之邀，获取了参加其和检科院合办的3月份“北京食物安天下度圭臬微生物学测验期间高等学习班”的培训学习，再次见到了难得的野兽敦厚、初度见到了检科院的何敦厚，听他们二东说念主分别素质产气荚膜梭菌的测验（野兽敦厚讲GB 8538-2016.58 产气荚膜梭菌，何敦厚素质 GB  4789.13-2012 的产气荚膜梭菌  ），发现我方的摸索获取的一些教学、履历、不雅点和他们好多场所异途同归。一时辰重逢恨晚，讲解有要求时候去参加培训很有必要，另一方面也讲解注解我方的责任莫得白干，自我探索精神也很伏击。    弄明白了2个关节里面产气荚膜梭菌的实验关节以偏执优劣和圭臬的一些暗坑。故意写出来共享给众人，让众人约略在进行这个实验花式时不至于掉坑里，让繁密一线微生物检测员约略在期间水平上走的更远。让检测数据更准确可靠。熟练掌持一门实验期间，无意候可以自我千里醉一下的，往大了说，微生物检测员便是食物安全的战士，站好岗可以让东说念主民生活更有保险（至少检测及格了不操心吃坏肚子）。